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細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑
點(diǎn)擊次數(shù):1571 更新時間:2016-01-08

(一)pH調(diào)整液

    合成培養(yǎng)液大多呈弱酸性,而細(xì)胞生長的zui適pH值為7.0~7.2,因此使用培養(yǎng)液時要調(diào)整pH,并注意培養(yǎng)過程中pH的變化,及時換液。常用的pH調(diào)整液包括NaHCO3溶液和Hepes緩沖液。

1.NaHCO3溶液NaHCO3是培養(yǎng)基中必須添加的成分,一般情況下按照說明書要求添加,以保證培養(yǎng)基在5%CO2的環(huán)境中pH達(dá)到設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)。通常情況下,培養(yǎng)液添加血清后可能偏酸,可臨時用NaHCO3溶液調(diào)節(jié)其pH值。常用的NaHC3溶液濃度為7.4%、5.6%、3.7%三種。調(diào)節(jié)pH時,NaHCO3溶液要逐滴加入,并不時搖動培養(yǎng)液,以防止加入過量。若pH過高時,可用高壓滅菌10%醋酸溶液或通人CO2氣體調(diào)節(jié)。配制時用三蒸水溶解后,過濾除菌,分裝備用。亦可使用高壓蒸氣滅菌,密封,4℃冰箱保存。

2.Hepes緩沖液是一種可以保持細(xì)胞培養(yǎng)過程中pH值較長時間穩(wěn)定的氫離子緩沖劑。一般在克隆化培養(yǎng)時要添加H印es緩沖液。通常使用濃度為10~15mmol/L。配制時,稱取所需的Hepes,用培養(yǎng)液溶解后,用1mmol/L NaOH調(diào)節(jié)pH到7.O,過濾除菌分裝后備用。

(二)抗生素液

    細(xì)胞培養(yǎng)中經(jīng)常使用的抗生素是青,俗稱“雙抗溶液”,可以預(yù)防絕大多數(shù)的細(xì)菌污染。使用的終濃度為100U/ml,為100μg/ml。常用Hanks或PBS配制為100倍濃縮液.分裝凍存,使用前經(jīng)稀釋后加入到培養(yǎng)液中。

(三)補(bǔ)充液

    在細(xì)胞代謝過程中起重要作用,合成培養(yǎng)基中都要添加。易降解,應(yīng)在使用前添加。常配制100倍濃度的濃縮液,濃度為200mmol/L。使用時,每lOOml培養(yǎng)液中加入0.5~2ml濃縮液,終濃度為1~4mmol/L。

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